滅菌，既是微生物測試的基礎(chǔ)，也是無菌產(chǎn)品生產(chǎn)的核心工藝環(huán)節(jié)，其效果驗證十分重要！
我們常用的濕熱滅菌，其效果驗證主要由物理確認(rèn)和生物學(xué)確認(rèn)兩部分構(gòu)成。
生物學(xué)確認(rèn)則主要是微生物挑戰(zhàn)試驗，該實驗是將一定量、已知特性值的耐熱芽孢（即生物指示劑）在設(shè)定的濕熱滅菌條件下進行滅菌，以驗證設(shè)定的滅菌工藝是否確實能使產(chǎn)品達(dá)到預(yù)定的無菌保證水平。
最終生物指示劑被殺滅的程度，是評價一個滅菌程序有效性的直觀指標(biāo)。
今天我們就給大家簡單介紹一下生物指示劑。
01.生物指示劑的定義
一種對特定滅菌程序有確定及穩(wěn)定耐受性的特殊活微生物制成品，可用于滅菌設(shè)備的性能確認(rèn)，特定物品的滅菌工藝研發(fā)、建立、驗證，生產(chǎn)過程滅菌效果的監(jiān)控 ，也可用于隔離系統(tǒng)和無菌潔凈室除菌效果的驗證評估等。（——源自《中華人民共和國藥典2020年版 四部》中的1421 滅菌法、9207滅菌用生物指示劑指導(dǎo)原則）
02.生物指示劑的分類及選擇
生物指示劑主要分為三大類：
1、載體型生物指示劑：
由微生物芽孢和載體經(jīng)包裝而成；
2、芽孢懸液生物指示劑：
芽孢混懸于液體中；
3、自含式生物指示劑：
芽孢和能夠恢復(fù)微生物生長的培養(yǎng)基系統(tǒng)組成。
芽孢懸液生物指示劑，例如安瓿式生物指示劑，主要用于濕熱滅菌的液體滅菌驗證，置于液體中進行使用。
自含式生物指示劑主要用于濕熱滅菌中飽和蒸汽滅菌的驗證，需與被滅菌物品—起置于滅菌艙內(nèi)進行使用。例如，檢測實驗室常用手提式或立式的蒸汽高壓滅菌鍋對培養(yǎng)基、試劑及實驗用具進行滅菌，其滅菌效果需定期使用自含式生物指示劑進行驗證。
安瓿式生物指示劑
03.生物指示劑的用法
使用方法
01
將生物指示劑數(shù)支分別放在滅菌器內(nèi)不易被滅菌完全的位置；
02
按規(guī)定的滅菌溫度（例如121℃±1℃）和時間（例如15min）進行滅菌處理；
03
滅菌完畢，將生物指示劑取出，冷卻至室溫；
04
培養(yǎng)及結(jié)果觀察：
安瓿式生物指示劑：
將生物指示劑垂直放入56℃±1℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，同時取一支未經(jīng)滅菌的指示劑，同步放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)作為陽性對照管，同時培養(yǎng)48h，觀察結(jié)果。
自含式生物指示劑：
垂直擠壓塑料管壓破管內(nèi)的玻璃管（內(nèi)裝紫色液體培養(yǎng)基），使菌片完全浸沒在培養(yǎng)基中；
將生物指示劑垂直放入56℃±1℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，同時取一支未經(jīng)滅菌的指示劑，同上處理，同步放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)作為陽性對照管，同時培養(yǎng)48h，觀察結(jié)果。
滅菌效果判定
A.?培養(yǎng)后當(dāng)生物指示劑管內(nèi)培養(yǎng)液由紫色變?yōu)?strong style="margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; font-size: 16px; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important;">黃色，即表示有菌生長，判定滅菌不合格；
B.?培養(yǎng)后當(dāng)生物指示劑管內(nèi)仍為紫色表示無菌生長，陽性對照培養(yǎng)液由紫色變?yōu)?strong style="margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important;">黃色，判定為滅菌合格。
04.生物指示劑的性能指標(biāo)
生物指示劑主要性能指標(biāo)為：菌種及其純度、總孢子數(shù)、D值、存活時間、殺滅時間。
●?總孢子數(shù)：生物指示劑芽孢含量應(yīng)在90%以上，濕熱滅菌生物指示劑的芽孢數(shù)范圍一般在1.0×105?5.0×106CFU。（依據(jù)中國藥典2020版四部9208進行檢測）
●?D值：即微生物的耐熱參數(shù)，是指一定溫度下，將試驗微生物殺滅90%所需的滅菌時間或滅菌劑量。
▲一般以時間（分）表示。D值越大，表明該微生物的耐熱性越強。
▲滅菌方法驗證時，微生物的耐熱參數(shù)一般使用D121℃。
▲D值需要特定的設(shè)備（抗力儀或油浴儀）方可測定。
●?存活時間：將生物指示劑暴露于滅菌條件下一定時間（盡可能長時間）后，使所有生物指示劑培養(yǎng)結(jié)果均為陽性。
●?殺滅時間：將所有生物指示劑暴露于滅菌條件下一定時間(盡可能短時間)后,使所有生物指示劑培養(yǎng)結(jié)果均為陰性。
F值又稱殺菌值，由于微生物的種類和溫度均為特指，通常F值要采用上下標(biāo)標(biāo)注，以便于區(qū)分。一般將標(biāo)準(zhǔn)殺菌條件下的F值記為在121℃熱力致死溫度下腐敗菌的熱力致死時間，用F0值表示。
05.北京陸橋生物指示劑產(chǎn)品
北京陸橋技術(shù)股份有限公司為 KINTEK 滅菌生物指示劑總代理，KINTEK滅菌指示劑系列產(chǎn)品適用于制藥、化妝品、食品等工業(yè)領(lǐng)域和各種檢測機構(gòu)。產(chǎn)品生產(chǎn)符合《消毒技術(shù)規(guī)范》、GB18281、ISO13485、《中國藥典》、EP、USP等法規(guī)要求，產(chǎn)品種類齊全、質(zhì)量穩(wěn)定，并支持不同滅菌條件的非標(biāo)定制。
用途：121℃壓力蒸汽滅菌過程及效果監(jiān)測
菌種：ATCC 7953 嗜熱脂肪芽孢桿菌（G. Stearothermophilus）
芽孢含量：5.0×105～3.0×106?CFU/ 支
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參考文獻(xiàn)
1. 中華人民共和國藥典2020年版 四部[S].
2. 化學(xué)藥品注射劑滅菌和無菌工藝研究及驗證指導(dǎo)原則[S].
3.?GB 18281.1~3-2015 醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 生物指示物[S].
4. GB/T 19972-2018醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 生物指示劑選擇、使用和結(jié)果判斷指南[S].
5. GB/T 24628-2009 醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 生物與化學(xué)指示物 測試設(shè)備[S].
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